1、收集：用18号穿刺器穿刺术，20ml注射器（含有肝素2000u）在髂前上棘抽取骨髓10ml。抽取骨髓时留意维持针管斜坡在骨髓内。快速抽取骨髓并使其和肝素匀称，避免造成血块。

2、分离纯化：经1200rpm离心10min，吸除顶层脂肪细胞，清洗三次。在骨髓中引入相对密度为1.073Percoll分离出来液。室内温度下3000g离心30min，有核细胞在分页面及顶层液态中，红细胞绝大多数在沉积中。用二倍容积的PBS稀释液，并再度离心。将细胞重悬在少糖10%DMEM FBS细胞培养液中。调节细胞相对密度为1.6*106个/cm2注射于塑造瓶中。37℃，摩尔分数为5%的CO2恒温培养箱中塑造，72d后弃去未贴壁细胞，之后每3天换液一次。当细胞汇聚90%单面细胞后，0.25%蛋白酶室内温度消化吸收传代培养，离心（1000rpm，10min），弃上清，沉积按1：1占比传代培养。

3、储存：搜集生长发育优良的细胞，取小量细胞混液（约0.1ml）记数细胞浓度值及冻前成活率。将细胞添加到含10%DMSO和30%血清蛋白的新鮮培养液中，用无菌检测塑胶冷藏储存管放进到程序流程减温盒中，于-70℃经24h后转到液态氮储存。30d后，恢复细胞，用椎虫蓝上色检验细胞活力，于37℃、摩尔分数为5%的CO2恒温箱中塑造，每日颠倒显微镜下观查细胞生长发育状况（细胞生长发育情况及总数）。关键观查指标值：1）人骨髓间充质干细胞的生长曲线图剖析；2）细胞制冷机组恢复生长发育特点剖析。